Pirsgirêkên Analyzerê PCR: Pirs û Pirsgirêkên Pirsîn têne pirsîn

Analîzên zincîra polonî (PCR) amûrên bingehîn in, di biyolojiya molekuler de ne, destûr didin ku lêkolîner ji bo serlêdanên ji lêkolînên genetîkî ji nav tespîtkirina klînîkî re ampûl bikin. Lêbelê, mîna her amûrek tevlihev, analîzek PCR dikare bi pirsgirêkên ku bandorê li ser performansa wê dike re rû bi rû bimîne. Ev gotar li ser hin pirsên hevbeş digerePCR AnalyzerPirsgirêk û çareseriyên pratîkî ji pirsgirêkên hevbeş re peyda dike.

1. Whyima reaksiyona PCR-ya min ne amade ye?

Yek ji pirsgirêkên herî gelemperî yên ku ji hêla bikarhêneran re rû bi rû ne, nebûna reaksiyona PCR-ê ye ku DNA ya Targetê ampûl bike. Ev dikare ji çend faktoran re were destnîşankirin:

Sêwirana Primer ya çewt: Bawer bikin ku destpêkên we ji bo rêzika armancê taybetî ne û germahiya melting a xweşik (TM) heye. Vebijarkên nermalavê ji bo sêwirana pêşîn bikar bînin da ku nekeve binpirsiya Nonspecific.

Tablonê DNA-yê ne bes e: Verast bikin ku hûn di dna şablonê de hêja taponê bikar tînin. Pir hindik dê bibe sedema qels an bê amûr.

Inhibitors di nimûneyê de: konteynir di nimûneyê de dikare reaksiyona PCR asteng bike. Difikirin ku DNA xwe paqij bikin an jî rêbazek derxistina cûda bikar bînin.

Solution: Sêwirana Primer-ya xwe kontrol bikin, Mezinahiya şablonê zêde bikin, û piştrast bikin ku nimûneya we nimûneyên we tune.

2 Whyima PRR-ya min mezinahiya çewt e?

Heke pîvana hilberê ya PCR ne wekî hêvî ye, dibe ku ew pirsgirêkek bi şert û mercên reaksiyonê an pêkhatên bikar anîn nîşan bide.

Amplification ne-taybetî: Ev dikare bibe heke destpêkek li ser malperek unintended be. Taybetmendiya pêşandanan bi karanîna amûrek wekî teqînê kontrol bikin.

Germahiya anormaliya şaş: Heke germahiya annealningareserkirina analîzê pir kêm e, dibe ku encam bibe. Optimîzekirina germahiya annealing bi gradient pcr.

Solutionareseriyê: Taybetmendiya Primer piştrast bikin û germahiya anormaliyê xweş bikin da ku rastiya hilberên PCR baştir bikin.

3. Analyzeriya min a PCR peyamek çewtiyê destnîşan dike. derewînê bedew û biçûk?

Mesajên çewtiyê li ser analîzek PCR-ê dikarin alarm bikin, lê ew bi gelemperî dikarin pirsgirêkên potansiyel peyda bikin.

Pirsgirêkên kalibrasyonê: Bawer bikin ku analîzerê PCR bi rengek rast tê qal kirin. Kontrolên domdar û kalibrasyonê yên birêkûpêk ji bo wergirtina encamên rast girîng in.

Koma Nermalavê: Carinan, Bûyerên Nermalavê dikarin bibin sedema pirsgirêkan. Komputera xwe nûve bikin û ji bo nûvekirinên nermalavê kontrol bikin.

Solutionareseriyê: Ji bo kodê çewtiya çewtiyê ya bikarhênerê ji bo kodê bikarhênerê binivîse û gavên pirsgirêkên pêşniyazkirî bişopînin. Karûbarên birêkûpêk dikare gelek pirsgirêkan bigire.

4. Whyima reaksiyona min a PCR inconsistent?

Encamên PCR yên Inconsistent dikarin ji ber çend sedeman dilêşin:

Qalîteya Reagent: Piştrast bike ku hemî reagent, di nav de enzîm, buffers, û dntps, nû û kalîteya bilind in. Reagentên qedandî an konteynir dibe ku bibe sedema guhêrbariyê.

Calibrasyona gerdûnî ya germî: Mîhengên germahiya nehevsazî dibe ku bandorê li pêvajoya PCR bike. Bi rêkûpêk kalibrasyona çîkolata germê kontrol bikin.

Solutionareseriyê: Reagentên kalîteyê yên bilind bikar bînin û bi rêkûpêk cycler xwe bi rêkûpêk calib bikin da ku encamên domdar bicîh bikin.

5 Howawa Karkirina PRC-ê PRCR baştir bikin?

Başkirina kargêriya reaksiyonên PCR dikare bibe sedema hilberên bilindtir û encamên pêbawer.

Conditionsertên reaksiyonê xweşbîn bikin: Ezmûna bi karanîna pîvanên cihêreng ên destpêkê, dna şablon û mgcl2. Dibe ku her reaksiyonek PCR ji bo performansa bêkêmasî şert û mercên bêhempa hewce dike.

Enzymên bi zagonî yên bilind bikar bînin: Heke rastbûn krîtîk e, bifikirin ku bikaranîna DNA-ya bilind a polymerase-ya bi zorê bikar bînin da ku di dema amplification de çewtiyan kêm bikin.

Solutionareseriyê: Ezmûnek xweşbîniyê ji bo dîtina mercên çêtirîn ji bo sazkirina taybetî ya PCR.

Bi kurtayî

Tengaskirina aPCR Analyzerdikare bibe peywirek xapînok, lê famkirina pirsgirêkên hevbeş û çareseriyên wan dikarin bi girîngî ezmûna PCR-ya we zêde bikin. Bi çareserkirina van pirsgirêkên hevbeş, lêkolîner dikarin encamên PCR baştir bikin û encamên pêbawer ên li serîlêdanên biyolojî yên molekular peyda bikin. Karûbarên birêkûpêk, hilbijartina baldar a reagents, û xweşbîniya şertên bertek nîşan dide ku analîzên PCR-ê serketî ne.