Faktorên navbeynkariyê di reaksiyonên PCR de

Di dema reaksiyonê PCR de, hin faktorên navbeynkar bi gelemperî têne dîtin.
Ji ber hestiyariya pir zêde ya PCR, konteynir tê hesibandin ku yek ji wan faktorên herî girîng bandor li encamên PCR dike û dikare encamên erênî yên derewîn hilberîne.
Wekhev rexneyî çavkaniyên cûrbecûr in ku rê li encamên derewîn-neyînî dibin. Ger yek an jî zêdetir perçeyên bingehîn ên tevliheviya PCR an jî reaksiyona amplification bixwe tê asteng kirin an jî mudaxele bikin, dabeşkirina tespîtkirinê dikare were asteng kirin. Ev dikare bibe sedema kêmkirina karbidestan û tewra encamên neyînî yên derewîn jî.
Digel astengiyê, windakirina yekbûna acid nukleîk a armancê dibe ku ji ber şandina û / an jî şertên hilanînê berî amadekirina nimûneyê pêk were. Bi taybetî, germên bilind an hilana neçar dibe ku zirarê bigihîje hucreyan û acîdên nukleîk. Rêzkirin û pêkanîna hucreyê û parafîkirina parafîn sedemên baş têne zanîn ji sedemên parçebûna DNA û pirsgirêkek domdar (hejmarên 1 û 2 bibînin). Di van rewşan de, tewra tecrîdkirina çêtirîn û paqijbûnê dê alîkariyê neke.

Gîha 1 | Bandora Immobilasyona li ser yekrêziya DNA
Agarose Gel Electrophoresis nîşan da ku kalîteya DNA ji beşên parafîn ên otopsiyan bi rengek zelal xuya dike. DNA ya dirêjahiya parçebûyî ya cûda di ekstraktan de li gorî rêbaza rastkirinê ve girêdayî bû. DNA tenê dema ku di nimûneyên nîgarkirî yên zikmakî de tête parastin û di formalin nebatî ya buffered de hate parastin. Bikaranîna bi rengek zexmî ya lêker an isbuffered an bêbandor, formalînînek formic a acid-formic a acid-form-formî encam di encama windabûna DNA de. Dabeşa mayî pir perçebûyî ye.
Li milê çepê, dirêjahiya perçeyan di cotkarên kilobase de tê gotin (KBP)

Figure 2 | Windakirina yekrêziya armancên acîdê nukleîk
(a) Gapek 3'-5 'li ser her du strands dê di encama DNA ya Target de têkeve. Pêkanîna DNA dê hîn jî li ser perçeyek piçûk pêk were. Lêbelê, heke malperek destpêka destpêkê li ser parçeyek DNA winda ye, tenê amplification linear pêk tê. Di doza herî favorî de, perçan dibe ku hevûdu ji nû ve bidin, lê dê dibe ku di astên piçûktir û jêrîn de bin.
(b) windabûna baregehan, bi piranî ji ber depirasyon û damezrandina tîrêjê ya thymidine, dibe sedema kêmbûna hejmara H-Bonds û kêmbûna di TM de. Di qonaxa germbûna dirêjkirî de, dê sereke dê ji Matrix DNA dûr bixe û dê di bin şert û mercên kêmtir hişk de jî nekeve.
(c) Bendavên Thimine yên nêzîkî TT dimer ava dikin.
Pirsgirêkek hevbeş a din a ku bi gelemperî di tespîtkirina molekulî de pêk tê serbestberdana kêm-çêtirîn a acîdên nukleîk ên armanckirî ye ku li gorî derxistina fenol-chloroform e. Di rewşên zehf de, ev dikare bi negatîfên derewîn re têkildar be. Pir dem dikare bi avakirina lîzîkî an enzymatic ya hilweşîna hucreyê were hilanîn, lê vê rêbazê bi gelemperî hestiyariya pcr ya kêm ji ber serbestberdana nasnameya nukleîk kêm dibe.

Di dema amplifasyonê de astengkirina çalakiya polîmerase

Bi gelemperî, astengkirin wekî konserek konteynir tê bikar anîn da ku hemî faktorên ku rê li ber encamên PCR Suboptimal destnîşan dikin. Bi hişmendiyek bi hişkî bi hişkî, ku çalakiya enzîmê, ango, ji hêla danûstendinê ve bi têkiliya çalak a dna polîmerase an jî cofacora wê (mînakî, mg2 + ji bo Taq DNA Polymerase kêm dike an kêm dike.
Parçeyên di nimûneyê an buffersên cihêreng de hene
Lêbelê, gelek têkiliyên di navbera beşên reaksiyonê û acîdên nukleîk ên hedef de wekî 'pcr inhibitors' têne destnîşan kirin. Carekê yekbûna hucreyê ji hêla tecrîdkirinê ve tê qewirandin û acidê nukleîk serbest tê berdan, têkilî di navbera nimûneyê û çareseriya wê ya derdorê û qonaxa zexm dikare bibe. Mînakî, 'SCAVENGERS'S DNA bi navgîniya ne-koval-an du-dorpêçandî bi navgîniya tecrîd û paqijkirinê bi kêmkirina hejmara armancên ku di dawiyê de bigihîje recesselê reaksiyona PCR.
Bi gelemperî, enfeksiyonên PCR di piraniya laş û reagentsên ku ji bo ceribandinên klînîkî de hatine bikar anîn hene), supponên organîk, glycogen, fat, ca2 + ion) û pêkhatên li jîngehê (fenol, metalên giran)

Zêdetirî zagonên PCR-ê di hucreyên bakterî û eukaryotî de têne dîtin, DNA-ya ne-armanc, makromolekulên DNA-ê yên matrices û amûrên laboratîf ên wekî glover û plastîk. Paqijkirina acîdên nukleîk di dema an piştî derxistinê de rêbaza bijarte ye ji bo rakirina enfeksiyonên PCR.
, Ro, alavên hilweşîna otomatîk ên cihêreng dikarin gelek protokolên manual biguhezînin, lê 100% başbûn û / an paqijkirina armancan qet carî nehatiye bidestxistin. Dibe ku nehfên potansiyel hîn jî di acîdên nukleîk ên paqijkirî de an jî dibe ku bandora xwe hildin. Stratejiyên cihêreng hene ku bandora enfeksiyonan kêm bikin. Hilbijartina polîmerasyona guncan dikare bandorek girîng li ser çalakiya inhibitorê hebe. Rêbazên din ên îsbatkirî ji bo kêmkirina astengkirina PCR-ê kêmbûna polîmerase zêde dibin an jî serlêdana additivesên wekî BSA zêde dikin.
Astengkirina reaksiyonên PCR dikare bi karanîna kontrola kalîteya navxweyî ya navxweyî (IPC) nîşan bide.
Pêdivî ye ku lênêrîn were girtin da ku hemî reagent û çareseriyên din ên di kîtek derxistinê de were derxistin, wek etanol, cetab, licl, guscn, sdsol, isopropanol û fenomal ji hêla şuştina şuştinê ya kûr ve. Li gorî mezinahiya wan ve girêdayî ye, ew dikarin PCR çalak bikin an asteng bikin.